Spektrofotometr ishlash prinsipi yorug'likning modda orqali o'tishida mavjud spektral o'zgarishlarni o'lchashga asoslangan. Asbob yorug'lik manbai, monoxromator, namuna idishi va detektordan iborat. Yorug'lik manbai keng spektral diapazonda nur chiqaradi va monoxromator yordamida kerakli to'lqin uzunligiga ajratiladi. Bu nur namuna orqali o'tadi, va moddaning singdirish xususiyatiga bog'liq ravishda yutiladi. Detektor qanchalik yorug'lik yutilganligini o'lchaydi va intensivlikni elektr signalga aylantiradi. Natijada moddaning konsentratsiyasi va optik zichligini aniqlash mumkin bo'ladi. Spektrofotometriya ko'pincha kimyo va biologiyada qo'llaniladi